一、 概述

临床基因扩增实验又称PCR（聚合酶链式反应）实验，是专门用来检验如艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段，是目前基因诊断中使用最多的方法。根据国家的相关政策和技术发展的实际情况，未来十几年内它可能会作为比指纹更为准确的与身份ID关联基因信息，成为每一个派出所办理身份证明的标配。它可以通过将病毒体内所含目的基因在短时间内进行五十万乃至上百万倍扩增的方法，测出一些病毒含量不高的感染体内是否含有特定的病毒。目前全国瞩目的新型冠状病毒也是可以通过PCR实验进行检测，30分钟即可产生准确结果。由于该检测方法可以测出普通方法难以检测出的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点，因此被临床医生广为认可，已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断。但是，这种实验需要有能保证绝对安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。各试验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。近年来业界对临床基因扩增检验实验室的建设越来越得到重视，因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起着至关重要的作用。本文主要从临床基因扩增检验实验室的平面布局，空调通风系统设计，气流控制和污染防治方面对PCR实验室设计中的主要特点做简要概括。

二、 PCR实验室平面布局

临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂存储和准备区域，标本制备区，扩增反应混合物配置和扩增区，扩增产物分析区。为了避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂存储和准备区域→标本制备区→扩增反应混合物配置和扩增区→扩增产物分析区的顺序进行。

三、 实验室空调通风系统设计及压力控制

PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为了避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。同时要求严格控制送排风比例以保证各实验区的压力要求。

1） 试剂贮存和准备区

本实验区主要进行的操作为贮存试剂和制备试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区域，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区域内，并在本区域内制备成所需要贮存的试剂。

本区域对于气流压力的控制没有严格的要求。

2） 标本制备区

本区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸（DNA、RNA）提取、贮存及将其加入扩增反应管和测定cDNA（互补DNA），RNA的合成。

本区相对于临近区域要求为正压，避免从邻近区域进入本区域的气溶胶污染。另由于加样操作中可能会发生气溶胶污染，所以尽量避免在本区域内不必要的走动。

3） 扩增反应混合物配置和扩增区

本区域主要进行的操作是DNA或cDNA的扩增。此外，已经制备的DNA模板和合成的cDNA（来自样本制备区）的加入和主反应混合液（来自试剂贮存和制备区）制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中，通常第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。

本区域相对于临近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量在本区内的不必要走动。个别操作如加样等应在超净化台内进行。

4） 扩增产物分析区

本区域主要进行的操作为扩增片段测的测定。如适用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设置。

本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其他区域。

四、 污染的预防与控制

    PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见的有以下集中污染类型：扩增产物的污染，天然基因组DNA的污染，试剂的污染及样本间的污染。由于一旦发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐，浪费人力物力；因此要避免污染，首先应是预防，而不是排除。

（1） 工作区域的严格划

  1. 各个实验区域设置合理；

         2. 各个实验区域要有明显的标记（如醒目的门牌或者不同颜色的地面等），以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。

（2） 合理的系统设置

          1. 合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统；

          2. 严格的气流压力控制，保证不同的试验区内不同的压力要求。

（3） 规范的操作

                      1.临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训，经培训合格后才能从事临床基因扩增检验工作；

                      2. 在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。此外操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施；

                      3. 清洁工作及时、正确。试验工作结束后，必须立即对本区进行清洁。除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消毒外，对一些实验设备还应进行高压消毒处理。

（4） 严格的管理

         1. 严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室，有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个试验区的门；

         2. 在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服（如不同颜色），当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其他区域；

         3.  尽量减少试验区内不必要的走动及减少交叉污染的可能性。

         4. 扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源，废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧等；

        5.  扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变的有毒物质，应特别注意实验人员的安全防护。

（5） 完备的实验室配套设施

       完备的实验室配套设施是保证实验室工作的必要条件，应根据各个实验室试验内容的不同配置相应的设备和仪器，如：超净工作台、离心机、加样器等。